线粒体免疫荧光大揭秘！共聚焦也能出好图！

超分辨显微镜线粒体实验室日常生物学研究生日常医学研究生日常共聚焦激光共聚焦显微镜激光共聚焦 [烟花R]首先是样本制备，样本需要优秀。【三分成像，七分制样，这个是任何显微镜技术都没法帮我们做到的[新月R]不要信某公司宣传的，以为换了显微镜就能拍出好图，纯忽悠，做好样本才是第一步[新月R][新月R][新月R]】 [烟花R]对于固定细胞的线粒体成像（免疫荧光标记法），比较通用的protocol如下: 1、PBS洗后，4%PFA固定30 min。 2、PBS洗3遍，0.1%tritonX破膜5 min。 3、PBS洗3遍，10%BSA封闭2h，pbs洗两遍。 4、3%BSA配的一抗 tomm20(三鹰 1:200)孵育过夜(12h)。 5、PBS摇床慢速洗5min*3，二抗室温1h。 6、摇床慢速洗5min*3，防淬灭封片剂封片。 [烟花R]试剂最好现配现用，使用时复温，更容易保持细胞状态。[烟花R]排查思路: 1、如果染色出来细胞本身状态特别差，完全看不到线粒体的形态或者糊的一片，考虑固定液出了问题。更换固定液【例如哒哒猫老师甄选:可用生工的4%PFA】2、如果能看到形态，就是很碎，考虑破膜太久了，降低破膜的时间。 [烟花R]做完片子，选择一台熟悉的共聚焦显微镜，进行愉快成像。只要样本OK，共聚焦显微镜也能拍出美图的，没有超分辨显微镜的同学也不要焦虑，能发文章的数据就是好数据，况且63X油镜的共聚焦拍线粒体完全足够的【在合集里面，有一篇笔记: 共聚焦从入门到精通，大家可以看一下[萌萌哒R]】[黄金薯R][黄金薯R][黄金薯R]有同学想看我们的标准片在共聚焦下的图像吗？想看的留个言！下期安排[萌萌哒R] …… …… 甲方爸爸广告时间（bushi[doge]） [烟花R]1、如果觉得共聚焦分辨率不够，但是又不想折腾满世界找超分辨，还想再提升一些分辨率，可以考虑把共聚焦数据给我，进行FINER图像解卷积处理，可直接提高共聚焦显微镜分辨率到next level【算法的力量，共聚焦数据直接变超分辨】[黄金薯R][黄金薯R][黄金薯R] [烟花R]2、当然也可以选择直接寄样本给我，感受60 nm超分辨显微镜【光学的力量】[黄金薯R][黄金薯R][黄金薯R] [烟花R][烟花R]样本赞助: 超视计科技四色固定样片（细胞核、Actin、Tubulin、线粒体）【本样片可出售[萌萌哒R]】 [烟花R][烟花R]设备赞助: 超视计科技 HIS-SIM智能超灵敏超分辨显微镜