在提取 RNA 的过程中,RNA 酶污染是一个严重的问题,因为 RNA 酶广泛存在且极为稳定,很容易导致 RNA 的降解,影响后续的实验结果。以下是一些摆脱 RNA 酶污染的有效方法。
首先,对于实验环境要严格把控。提取 RNA 的操作最好在专门的无 RNA 酶环境中进行,如超净工作台。在实验前,用专门的 RNA 酶清除剂对台面、仪器等进行彻底清洁和擦拭。此外,要保持实验室的空气清洁,避免尘埃中可能携带的 RNA 酶污染。
实验所用的器具也至关重要。所有接触 RNA 的塑料和玻璃器皿都需要特殊处理。玻璃器皿可以在 180℃烘烤至少 8 小时,以灭活可能存在的 RNA 酶。塑料耗材则应使用无 RNA 酶的产品,并且在使用前要确保包装完整,未被污染。
在试剂方面,要使用经处理的无 RNA 酶水来配制溶液。购买的试剂要确保其质量可靠,无 RNA 酶污染。对于一些自制的缓冲液等试剂,可以加入适量的 RNA 酶抑制剂,如焦碳酸二乙酯(DEPC)。不过需要注意的是,DEPC 本身有一定毒性,使用后要保证其完全去除。
操作人员自身也是一个潜在的污染源。在操作前,要佩戴干净的手套,并经常更换,因为手上可能存在 RNA 酶。实验人员的头发、皮肤等也可能携带 RNA 酶,因此要穿戴合适的实验服和帽子。
在 RNA 提取过程中,动作要迅速,尽量减少 RNA 在空气中暴露的时间。并且在整个过程中要避免交谈、咳嗽等可能将 RNA 酶带入实验体系的行为。通过以上一系列严格的措施,可以有效地摆脱 RNA 酶污染,提高 RNA 提取的质量。