从0开始成像！保姆级线粒体内膜成像指南！

线粒体 mtDNA 激光共聚焦显微镜 医学研究生日常 生物学研究生 从0开始学习线粒体成像的粉丝[暗中观察R][暗中观察R][暗中观察R] 第二次过来成像就直接拿捏🤏🏻 只需要注意4️⃣点，从0开始直接拍到🔝级别线粒体图像: 1、选择用优质共聚焦小皿，劣质共聚焦皿会严重影响成像质量，建议使用Cellvis、赛默飞等； 2、保持细胞最佳的生理状态，不要出现爬片倒扣成像、活细胞成像前加防淬灭剂等严重影响细胞状态操作； 3、选择PKmito系列线粒体染料，以及mtDNA染料； 4、选择HIS-SIM活细胞超分辨显微镜或者激光共聚焦显微镜成像。使用共聚焦的话，无法拍到一根一根的线粒体内嵴，但是线粒体形态可以拍的清楚（63或者100油镜下） [红色心形R][红色心形R][红色心形R][红色心形R][红色心形R] 实验步骤: [一R]细胞铺皿。 注意细胞密度控制在，上机时细胞密度为50%-70%，单层不堆叠，细胞尽量舒展。可以在第一天铺皿后，在第三天进行成像。 [二R]使用PKMDR+SYBR™ Gold，进行细胞线粒体和mtDNA染色操作。 1、准备工作：预热PBS和完全培养基。 2、稀释染料：使用EP管，取1mL完全培养基，加入0.4μL PKMDR母液和0.1 uL的SYBR™ Gold母液，混匀。 3、移除旧的培养基，用PBS清洗细胞2次。 4、加入1mL含有染料的完全培养基，将细胞转移至37℃，5%CO2培养箱孵育10min。 5、取出细胞，移除含有染料的完全培养基，用PBS清洗2次，加入新鲜完全培养基，去成像。 [三R]使用HIS-SIM活细胞超分辨显微镜或者激光共聚焦显微镜成像。 1、启动HIS-SIM显微镜。 2、选择100X油镜或者63X油镜。 3、滴加镜油、上样、调焦面。 4、选择细胞舒展、线粒体健康的细胞进行成像。 [红色心形R][红色心形R][红色心形R][红色心形R][红色心形R]