ChIP后的WB多重要？

近些年来，越来越多的期刊杂志对WB结果进行严格要求。比如：“提供未经编辑的WB原始图像”、“进行条带间比较分析时，应在同一张膜上”、“不接受高对比度的WB图片”等，部分期刊杂志甚至要求“提供未经裁剪的WB全膜图像”！WB检测不仅是期刊杂志的重要审核对象，也在一定程度反映了ChIP实验的好坏。读懂ChIP后的WB结果，能让我们对于实验有更清晰的判断、更有底气。

ChIP后的WB怎么看？

这个结果就非常不错：从左往右共有10条泳道。最右边的泳道是Marker，标记蛋白分子大小。左边的9条泳道划分为3个生物学重复（红框标记），每个生物学重复有3条泳道，分别是Input、IP、IgG。Input：ChIP实验前取部分样品，不经免疫沉淀，用于检测样品中目的蛋白的表达。IP：利用特异性抗体进行免疫沉淀。与IgG对比，说明免疫沉淀过程目的蛋白是否被显著富集，图中IP使用H3K4me2抗体。IgG：阴性对照。使用IgG代替特异性抗体进行免疫沉淀，用于排除其他因素（非特异结合）对ChIP实验的影响。由上图可知：Input显示样品中目的蛋白有表达。并且IP相较IgG，目的蛋白经免疫沉淀，存在显著的、特异性富集。ChIP实验十分成功！（注：抗体重链条带为加入二抗孵育时，因二抗结合一抗、IgG的重链而产生，55KD附近）。至此，ChIP-seq完成了最关键的一步。有了这张漂亮的ChIP后WB检测结果图，理想的文章成果也不再遥远。最终，上述结果发表在Cellular & Molecular Immunology（IF24.1）上。

ChIP-seq成果展示（节选）

TF 发表于Redox Biology（IF11.4）

Histone modification 发表于Nature Communications（IF16.6）