FireGen®小鼠组织直接PCR扩增试剂盒适用于小鼠基因克隆、转基因小鼠、基因敲除小鼠的快速 PCR 鉴定。
该款试剂盒有很多优点，使用时省时省力省心，是小鼠基因型鉴定实验的良好选择。关于其优点，简单总结几条，如：
1、极速样本裂解：5min完成样本裂解过程；
2、适用性广：适合小鼠鼠尾、耳朵、脚趾、肌肉等组织；
3、特色小样本提取，减少对动物的伤害：仅需1-2mm的小鼠组织；
4、三步操作，省心省力：混匀-孵育(55℃，5min) - 离心(10000rpm，1min)；
5、试剂组分简单：无需使用有机试剂及蛋白酶K；
6、一步高效PCR：百余次工艺优化的含染料TaqMix，扩增片段长度可达5kb。
虽然该款产品对操作偏差、样本特殊性等问题的包容性比较高，但是生命科学实验本就是一场探索之旅，在具体结果展现层面，肯定会有不如预期的那一部分。
或许，此刻的些许不如意，却正是我们寻找原因再次成长的契机。下面分享下FireGen®小鼠组织直接PCR扩增试剂盒使用过程中遇到几种问题时的原因探索及解决方案，以期对您的实验有所帮助。
阳性对照和样本都未出现扩增条带可能原因：
(1)PCR条件并非最优
(2)2×FG TaqMix(With Dye)保存不当
(3)引物并非最优
推荐解决方案：
(1)推荐使用梯度PCR摸索最佳PCR反应条件。
(2)2×FG TaqMix(With Dye)应在-20℃保存,使用过程中冰浴保存。避免反复冻融。
阳性对照有条带，但是样本无条带或者条带比较弱可能原因：
(1)PCR条件并非最优
(2)DNA模板量太大
(3)基因组断裂或者降解
(4)PCR循环数不合适
(5)组织块过大
(6)扩增片段太大
(7)引物浓度不合适
推荐解决方案：
(1)推荐使用梯度PCR摸索最佳PCR反应条件。
(2)增大PCR反应体系，过多使用DNA模板会导致扩增效率下降，推荐使用模板量为0.5-2μL。
(3)提取基因组DNA可在-20℃保存至少1个月。
(4)增加循环数，推荐使用35-40个循环。
(5)推荐组织块大小为1-2mm,组织块过大可适当减小或者增加Mu-DNA用量。
(6)推荐扩增5kb以内基因。
非特异性条带多可能原因：
(1)退火温度偏低
(2)PCR循环数过多
(3)引物浓度过高
(4)引物并非最优
推荐解决方案：
(1)推荐使用梯度PCR对退火温度进行摸索。
(2)推荐使用35-40个循环进行扩增。
(3)适当调低引物浓度，使引物终浓度在0.1-0.5μM。
(4)重新设计引物。
阴性对照出现条带可能原因：
(1)引物污染
(2)无菌水污染
(3)操作工具污染
(4)样本间交叉污染
(5)PCR产物间污染
推荐解决方案：
(1)使用耗材需要进过无酶处理。
(2)使用移液器时防止液体飞溅。
(3)减少开盖次数，防止气溶胶污染。
(4)使用的吸头、离心管等耗材应丢弃在含有75%乙醇或核酸消除剂的容器中，防止形
成环境污染。
(5)定期对样本处理区域进行消毒。
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